2.4 萃取试剂/洗脱剂种类对提取栀子油中藏红花酸的栀油中藏影响
乙酸为萃取试剂时，萃取得到的红花萃取剂相在下层，油相在上层；乙腈和甲醇为萃取试剂时，及其究萃取剂相在上层，法测油相在下层；乙醇为萃取试剂时，定研溶液不分层且较混浊。栀油中藏异丙醇为萃取试剂时，红花溶液清澈且不分层。及其究
因此，法测乙醇和异丙醇作为萃取试剂的定研样品不能进行液相分析，对乙酸、栀油中藏乙腈、红花甲醇为萃取试剂处理的及其究样品进行液相检测。结果如图4所示，法测甲醇为萃取试剂得到的定研藏红花酸浓度平均值为69.65 μg/g，乙腈为萃取试剂得到的藏红花酸浓度平均值为65.52 μg/g，乙酸为萃取试剂得到的藏红花酸浓度平均值为62.79 μg/g。
因此甲醇的萃取能力最强，为液液萃取的最优萃取试剂，亦即固相萃取中的最优洗脱剂。
2.5 萃取试剂/洗脱剂浓度对提取栀子油中藏红花酸影响
以70%甲醇为萃取试剂得到的样品出现部分乳化现象，样品较浑浊，透光度低，不能进行液相分析。随着甲醇浓度升高，溶液逐渐清晰，透光度变好，90%和100%甲醇萃取得到的样品都较清晰。如图5所示，100%甲醇的萃取能力最强，为液液萃取的最优萃取试剂浓度，亦即固相萃取中的最优洗脱剂浓度。
2.6 温度对提取栀子油中藏红花酸的影响（超声辅助液液萃取）
在上述筛选出的最优条件下（以DMF为溶油试剂，料液比0.5 g油：5 mL DMF，100%甲醇为萃取试剂），进一步对可能的影响因素，即超声温度进行优化。结果如图6所示，藏红花酸含量随温度的增加呈现出先下降后上升的变化趋势，然而，总体上，改变温度对提取藏红花酸的影响不大。因此，从节约能耗、简化实验操作、提高检测效率角度考虑，超声辅助液液萃取可在常温下进行。
2.7 时间对提取栀子油中藏红花酸的影响（超声辅助液液萃取）
在上述筛选出的最优超声辅助液液萃取条件下（以DMF为溶油试剂，料液比0.5 g油：5 mL DMF，100%甲醇为萃取试剂），进一步对可能的另一个影响因素，即超声时间进行优化。实验温度为30 ℃，结果如图7所示，总体上，改变时间对提取藏红花酸的影响都不大。因此，从节约时间成本、提高检测效率角度考虑，超声辅助液液萃取可在2 min条件下进行。
2.8 萃取次数对提取栀子油中藏红花酸的影响（超声辅助液液萃取）
在上述筛选出的最优超声辅助液液萃取（以DMF为溶油试剂，料液比0.5 g油：5 mL DMF，100%甲醇为萃取试剂，常温，超声萃取2 min）条件下，进一步对可能影响藏红花酸提取效果的因素，即萃取次数进行优化。如图8所示，随着萃取次数的增多，藏红花酸含量仅略微增加。出于提高效率、节约成本和时间角度考虑，萃取1次为最优条件。
综上所述：将2种前处理方法（超声辅助液液萃取和固相萃取）的最优条件及最优条件下获得的的藏红花酸含量进行比较，结果如表1所示，超声辅助液液萃取优于固相萃取。因此，超声辅助液液萃取为筛选出的最优前处理方法，9组平行样本检测到的栀子油中藏红花酸含量的平均值为69.65 μg/g（RSD=4.45%）。
2.9 加标回收率
选择超声辅助液液萃取为最终前处理手段，并在上述最优实验条件下，进行加标回收实验。分别吸取1.2.1配置的12 μg/mL藏红花酸标准储备液100、200、300 μL，其对应的浓度分别为0.12、0.24、0.36 μg/mL。每一添加水平的样品数为3个。先测定样品原香菜籽油中藏红花酸的本底含量，再测定加标后藏红花酸的含量，计算加标回收率。得到平均加标回收率为86.61%，平均RSD=1.16%。表明该方法具有较好的稳定性，可实现栀子油中藏红花酸的准确定量。
3 结论
藏红花酸作为栀子油中的重要微量营养成分，很可能成为评价栀子油品质的一个重要指标。因此，文章对栀子油中藏红花酸的提取及HPLC检测方法进行了系统研究。首先利用HPLC建立藏红花酸的标准曲线，回归方程y=115356x—26489，R2=0.9996，线性关系良好，检出限低至0.21 μg/mL，定量限低至0.7 μg/mL。然后筛选得到超声辅助液液萃取为最优提取方式；选用DMF为溶油试剂，料液比0.5 g油：5 mL DMF，100%甲醇为萃取试剂，室温超声2 min，萃取1次，9组平行样本检测得到藏红花酸的平均值为（69.65±3.17）μg/g（RSD=4.45%），平均加标回收率为86.61%（平均RSD%=1.16%）。
该方法操作简单、耗时少、耗能低、准确性高、稳定性好，可以实现栀子油中藏红花酸的快速、准确定量，为从栀子中提取藏红花酸方面的研究提供了方法学基础，对栀子油的功能性开发及应用具有重要价值和意义。
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